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如何選擇一臺適合自己的顯微鏡——光學部件物鏡的選擇(下)
來源: | 發(fā)布日期:2022-06-19 18:19:10
                                                 

伙計們,我又來了~

   

本期給大家?guī)盹@微鏡物鏡的知識。

   

地球上的每個人都知道什么是物鏡。~

   

物鏡是顯微鏡的靈魂,物鏡是影響清晰度的*重要部分。

   

   

選擇物鏡時需要考慮以下問題:

   

1、放大倍數需要多大?

   

● 物鏡可根據其放大率分為三類。包括:低倍物鏡(2x、4x/5x和10x),中倍物鏡(20x、40x)和高倍物鏡(60x/63x、100x)。除了物鏡的放大率不同外,物鏡的介質也不同。例如,對于高倍鏡頭(60x和100x),通常使用浸油來獲得高分辨率??諝獗挥米鞣糯舐瘦^低的鏡頭的介質。

   

2、選擇哪種觀察方法?

   

● 顯微物鏡的類型很多,應用場景也不一樣。根據觀察方法的不同,有不同的類型。物鏡的觀察方法通常標記在物鏡的外殼上。

   

● BF:明場;DF:暗場;PH:相差;PO:偏光;DIC:微分干涉;FL:熒光觀察(藍、綠、紫等);UVFL:紫外熒光觀察。

   

3、如何選擇成像效果好的物鏡?

   

● ①選擇具有平場矯正功能的物鏡,即標有平場矯正功能的物鏡Plan。②成像效果主要根據色差校正能力來判斷:消色差物鏡(Achro ** tic):紅藍光的色差只能校正。半復消色差物鏡(FL):紅、綠、藍三色光的色差可以校正。全復消色差物鏡(Apo):紅、綠、藍三色光的色差可以校正兩次,紅、藍兩色光的球差可以校正。

   

● 透明切片可選擇平場消色差物鏡(Ach)。熒光可以選擇半復消色差物鏡(FL),而且工作距離長,可以看玻片或者培養(yǎng)皿。如果需要更好的成像效果,可以選擇全復消色差物鏡(Apo),但Apo物鏡工作距離不長,只適用于玻片,不適用于培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶等厚樣品。

   

   

4、分辨率的要求是什么?

   

● 顯微鏡的分辨率是兩點之間的*小距離,分辨率越小,分辨率越高。(NA與分辨率成正比,NA = n * sin α。與放大率成正比,與景深成反比。在相同的放大倍數下,NA值越高越好。滿足工作距離時選擇NA物鏡值高。

   

   

5、工作距離需要多長?(WD)

   

● 可分為:①物鏡:工作距離小,可觀察切片,但不能觀察培養(yǎng)皿。②長工作距離物鏡:用于倒置顯微鏡,可滿足組織、懸浮液等材料的鏡檢。

   

   

6、玻片或培養(yǎng)板的厚度是多少?

   

● 標記物鏡光學類型的背面(∞/0)(210/0),也就是說,斜杠后面的數字代表了玻璃的厚度,(∞/0.17)(210/0.17),玻片厚度適用0.17毫米。如果使用不合適的蓋玻片,則會出現明顯的球差(不同角度的光不會聚集在同一高度),從而降低成像的對比度和分辨率。NA物鏡值越高,對蓋玻片的厚度越敏感,所以要選擇正規(guī)的蓋玻片。NA值的物鏡和長工作距離的物鏡可以用可調蓋玻片厚度調節(jié)環(huán)矯正不同厚度的玻璃,可以用來觀察培養(yǎng)皿。觀察時,可以調整到相應的培養(yǎng)皿厚度,或者使用共聚焦培養(yǎng)皿,中間厚度也是0.17。

   

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